Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM63A (h): sc-411328

Présentation

TMEM63A code une protéine transmembranaire à passages multiples, supposée fonctionner comme un canal ionique osmosensible et mécanosensible, reliant les variations de tension membranaire et de volume cellulaire au maintien de l’homéostasie ionique. Elle a été impliquée dans des processus liés à la mécanotransduction qui influencent la signalisation intracellulaire, l’excitabilité membranaire et l’adaptation au stress, avec un crosstalk potentiel avec des voies dépendantes du calcium. Les profils d’expression et les premières études fonctionnelles suggèrent une pertinence pour la physiologie sensorielle ainsi que pour des contextes neuronaux ou épithéliaux où les signaux osmotiques et mécaniques sont prédominants. La dérégulation des programmes de transport membranaire et de mécanosensation est largement associée à des troubles neurologiques et de l’homéostasie, ce qui fait de TMEM63A une cible utile pour explorer ces mécanismes dans des modèles cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM63A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM63A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM63A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM63A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM63A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM63A pour l'étude de la signalisation de TMEM63A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM63A essentiels à la fonction de TMEM63A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM63A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM63A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM63A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM63A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM63A plasmide HDR (h) et le TMEM63A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM63A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM63A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.