Partículas Lentivirales de Activación (h) TMEM55B: sc-410227-LAC

TMEM55B codifica una fosfatasa transmembrana de fosfoinosítidos implicada en la regulación de los reservorios de fosfato de fosfatidilinositol que controlan la identidad y el tráfico de membranas. Al modular la señalización de fosfoinosítidos en endosomas y lisosomas, TMEM55B puede influir en la maduración de vesículas, la clasificación de carga y la dinámica de membranas asociada a la autofagia. La alteración de la homeostasis de los fosfoinosítidos se relaciona de forma amplia con las respuestas al estrés celular y con una señalización de crecimiento desregulada, lo que hace que TMEM55B sea relevante para estudios de la función de orgánulos en contextos asociados a enfermedad. Por ello, su expresión y actividad resultan de interés en investigaciones mecanísticas sobre remodelación de membranas, detección de nutrientes y el “crosstalk” entre vías que depende de la señalización lipídica específica de compartimento.

Las partículas de activación lentiviral TMEM55B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM55B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM55B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM55B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM55B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM55B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.