Partículas Lentivirales de Activación (h) TMEM38B: sc-412461-LAC

TMEM38B codifica una proteína multipaso de membrana del retículo endoplásmico que forma un canal catiónico implicado en la regulación del manejo intracelular del calcio. Al modular el flujo de Ca2+ y acoplar la dinámica del calcio del RE con la señalización de excitación–contracción y de adaptación al estrés, TMEM38B puede influir en procesos como la homeostasis del calcio, la función del RE y programas transcripcionales aguas abajo. La alteración genética de TMEM38B se ha vinculado a fenotipos esqueléticos, incluidas formas de osteogénesis imperfecta, lo que subraya su relevancia para la biología ósea y la integridad del tejido conectivo. Estas propiedades hacen de TMEM38B una diana útil para estudiar la señalización dependiente de calcio, las vías relacionadas con el RE y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral TMEM38B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM38B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM38B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM38B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM38B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM38B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.