Plásmido Doble Nickase (m) TMEM38A: sc-428763-NIC

Tmem38a codifica TMEM38A, una proteína de membrana del retículo endoplásmico implicada en la homeostasis iónica intracelular y en el acoplamiento excitación–contracción mediante la regulación de la dinámica de liberación de calcio. En el ratón, TMEM38A se asocia con la fisiología del músculo esquelético y contribuye a procesos que determinan el manejo del calcio en el RE, la excitabilidad de la membrana y las vías de señalización posteriores sensibles al flujo de calcio. La alteración de la actividad de TMEM38A puede modificar programas transcripcionales dependientes de calcio y respuestas al estrés que influyen en la función de las fibras musculares y en la adaptación metabólica. Estas características hacen de TMEM38A un objetivo relevante para estudiar los mecanismos subyacentes al rendimiento muscular, fenotipos asociados a miopatías y trastornos más amplios relacionados con alteraciones de la señalización del calcio.

TMEM38A El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tmem38a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tmem38a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tmem38a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tmem38a alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.