Plásmido CRISPR de Activación (h2) TMEM215: sc-408002-ACT-2

El gen humano TMEM215 codifica la proteína transmembrana 215, una proteína de membrana de múltiples pasos predicha que se cree que se localiza en membranas celulares, donde podría contribuir a la organización de la membrana, a procesos asociados al transporte o a la regulación dependiente de señales de la homeostasis celular. Aunque TMEM215 sigue estando caracterizado de manera incompleta, datos de expresión y de asociación genética lo han vinculado con vías relevantes para la proliferación celular, la diferenciación y las respuestas al estrés, lo que sugiere funciones dependientes del contexto en la fisiología de los tejidos. Se han descrito patrones de expresión alterados de TMEM215 en conjuntos de datos relacionados con enfermedades, incluidos el cáncer y otros trastornos complejos, lo que respalda su utilidad como diana para estudios de genómica funcional sobre la biología de proteínas de membrana. La edición génica de TMEM215 permite la investigación mediante pérdida o ganancia de función de su localización subcelular, sus interacciones proteína–proteína y sus efectos transcripcionales o fenotípicos posteriores en modelos celulares humanos.

TMEM215 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM215 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM215 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM215 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM215, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM215. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM215 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM215 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM215 en células tumorales con expresión de TMEM215 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.