Partículas Lentivirales de Activación (h2) TMEM171: sc-408549-LAC-2

El gen humano TMEM171 codifica la proteína transmembrana 171, una proteína de membrana multipaso prevista que está enriquecida en las membranas celulares, donde se cree que influye en la organización de la membrana y el tráfico intracelular. Aunque sus socios moleculares y sus efectos de señalización aún no están completamente definidos, TMEM171 se estudia en el contexto de procesos asociados a la membrana, como el transporte vesicular, la compartimentalización de complejos de señalización y la regulación de las interacciones célula–célula o célula–matriz. Se han reportado alteraciones en la expresión de TMEM171 en varios conjuntos de datos transcriptómicos relevantes para enfermedades, lo que impulsa a investigar cómo las dinámicas de membrana dependientes de TMEM171 podrían afectar la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La edición génica de TMEM171 permite el análisis funcional de este factor de membrana poco estudiado, incluidas evaluaciones de pérdida de función, el mapeo de dominios y estudios de localización para vincular TMEM171 con vías y fenotipos específicos en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral TMEM171 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM171 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM171 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM171, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM171. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM171 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.