Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM143: sc-412498-ACT

TMEM143 code une protéine transmembranaire multipasse dont on pense qu’elle se localise aux membranes intracellulaires et contribue à l’organisation membranaire ainsi qu’aux processus de trafic qui façonnent l’homéostasie des organites. En tant que membre de la famille TMEM encore peu caractérisé, TMEM143 est étudié dans le contexte de la signalisation compartimentée, du tri des protéines et du remodelage des systèmes membranaires en réponse au stress. La dérégulation des protéines transmembranaires et du trafic est fréquemment associée à une altération du contrôle de l’état cellulaire, notamment des changements de prolifération, de différenciation et de tolérance au stress, ce qui rend TMEM143 pertinent pour les études mécanistiques de l’adaptation cellulaire. La mesure de l’expression et de la fonction de TMEM143 peut soutenir les efforts de cartographie des voies dans les réseaux de signalisation associés aux membranes et la découverte de phénotypes dans des modèles de cellules humaines.

TMEM143 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM143 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM143 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM143 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM143, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM143. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM143 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM143 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM143 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM143 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.