Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM143: sc-412498-ACT

TMEM143 codifica una proteína transmembrana multipaso que se cree que se localiza en membranas intracelulares y contribuye a la organización de membranas y a procesos de tráfico que moldean la homeostasis de los orgánulos. Como miembro de la familia TMEM pobremente caracterizado, TMEM143 se estudia en el contexto de la señalización compartimentalizada, la clasificación de proteínas y la remodelación adaptativa al estrés de los sistemas de membrana. La desregulación de proteínas transmembrana y de tráfico se asocia con frecuencia a alteraciones en el control del estado celular, incluidos cambios en la proliferación, la diferenciación y la tolerancia al estrés, lo que hace que TMEM143 sea relevante para estudios mecanísticos de la adaptación celular. Medir la expresión y la función de TMEM143 puede apoyar los esfuerzos de mapeo de vías en redes de señalización asociadas a membrana y el descubrimiento de fenotipos en modelos de células humanas.

TMEM143 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM143 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM143 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM143 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM143, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM143. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM143 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM143 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM143 en células tumorales con expresión de TMEM143 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.