Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM126A (h): sc-406768

Présentation

TMEM126A code une protéine transmembranaire associée aux mitochondries, impliquée dans la biologie de la chaîne respiratoire et le maintien de la capacité de phosphorylation oxydative. Des études relient TMEM126A à des processus associés au complexe I mitochondrial, influençant l’équilibre rédox cellulaire, la production d’ATP et la sensibilité au stress métabolique. Une altération de la fonction de TMEM126A a été associée à des phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial, notamment des présentations neuro-ophtalmiques telles que l’atrophie optique autosomique récessive, ce qui en fait un gène pertinent pour étudier la vulnérabilité bioénergétique dans les cellules humaines. TMEM126A constitue donc une cible utile pour explorer le contrôle qualité mitochondrial, les voies de signalisation d’adaptation au stress et les conséquences en aval sur la survie cellulaire et les programmes de différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM126A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM126A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM126A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM126A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM126A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM126A pour l'étude de la signalisation de TMEM126A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM126A essentiels à la fonction de TMEM126A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM126A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM126A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM126A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM126A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM126A plasmide HDR (h) et le TMEM126A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM126A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM126A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.