Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM125: sc-414318-ACT

TMEM125 humano codifica una proteína transmembrana multiespanning predicha, con una anotación funcional limitada, en consonancia con posibles funciones en la organización de membranas y la regulación de la señalización intracelular. Como factor presuntamente asociado a membranas, TMEM125 se estudia en el contexto de la homeostasis de orgánulos, el tráfico de proteínas y las vías de respuesta al estrés que influyen en la supervivencia y la adaptación celular. Conjuntos de datos transcriptómicos y de asociación genética han vinculado cambios en la expresión de TMEM125 con estados celulares relevantes para enfermedad, incluidos programas metabólicos e inflamatorios alterados, lo que la convierte en un gen de interés para el perfilado mecanístico. La modulación experimental de TMEM125 respalda esfuerzos de mapeo de vías en los que las proteínas de membrana pueden influir en la señalización proximal a receptores, la dinámica vesicular y las respuestas transcripcionales posteriores.

TMEM125 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM125 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM125 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM125 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM125, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM125. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM125 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM125 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM125 en células tumorales con expresión de TMEM125 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.