Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMED9 (h): sc-407215

Présentation

TMED9 (membre 9 de la famille p24) code un récepteur de cargaison transmembranaire de type I de la famille p24/TMED, localisé principalement dans la voie sécrétoire précoce. TMED9 participe au transport vésiculaire dépendant de COPI et de COPII, en soutenant la sélection des cargaisons et leur trafic entre le réticulum endoplasmique, le compartiment intermédiaire RE–Golgi et l’appareil de Golgi, et contribue à l’homéostasie des organites ainsi qu’au contrôle qualité des protéines. Par ces fonctions, TMED9 influence la dynamique de sécrétion et la distribution intracellulaire des protéines membranaires et sécrétées, des processus étroitement liés aux réponses au stress du RE et à la protéostasie. Un trafic sécrétoire dérégulé et des défauts de transport RE–Golgi ont été impliqués dans diverses maladies humaines, notamment dans le cancer, via le remodelage de la sécrétion et des voies d’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMED9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMED9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMED9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMED9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMED9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMED9 pour l'étude de la signalisation de TMED9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMED9 essentiels à la fonction de TMED9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMED9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMED9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMED9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMED9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMED9 plasmide HDR (h) et le TMED9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMED9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMED9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.