Plásmido CRISPR de Activación (h) TMED2: sc-402765-ACT

TMED2 (proteína 2 de tráfico p24 transmembrana) es una proteína de membrana tipo I de la familia de receptores de carga p24 que cicla entre el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi para regular la gemación de vesículas, la selección de carga y la homeostasis de la vía secretora. Al participar en el tráfico dependiente de COPI/COPII y en el control de calidad temprano de la secreción, TMED2 influye en la maduración y la entrega a la superficie de múltiples proteínas de membrana y secretadas. La alteración del tráfico secretor y de la dinámica del transporte RE–Golgi se asocia con frecuencia a respuestas de estrés de la proteostasis y a cambios en la salida de señalización celular. La desregulación de miembros de la familia p24, incluido TMED2, se ha relacionado en la literatura con la biología tumoral y otras afecciones en las que la secreción aberrante, el tráfico de receptores y las vías de estrés celular contribuyen a fenotipos relevantes para la enfermedad.

TMED2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMED2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMED2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMED2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMED2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMED2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMED2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMED2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMED2 en células tumorales con expresión de TMED2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.