TLR9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400600-ACT

TLR9はToll様受容体9（Toll-like receptor 9）をコードしており、エンドソームに局在するパターン認識受容体として、微生物およびミトコンドリアDNA中の非メチル化CpGモチーフを検知し、自然免疫シグナル伝達を開始します。リガンド結合により、TLR9は主にMYD88を介してシグナルを伝達し、IRAK/TRAF6依存性のカスケードを活性化してNF-κBおよびIRFの転写プログラムへと収束させ、炎症性サイトカインおよびI型インターフェロン応答を促進します。この経路は樹状細胞の成熟、B細胞の活性化、ならびに抗微生物防御を形成し、その制御破綻は慢性炎症や自己免疫に関連した免疫活性化に関与することが示唆されています。そのためヒトTLR9は、免疫恒常性に関わる核酸センス、エンドソーム輸送、PRR間クロストークのネットワークの観点から広く研究されています。

TLR9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLR9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TLR9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLR9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLR9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TLR9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLR9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTLR9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLR9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTLR9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。