Plasmide CRISPR d'Activation (h) TLR7: sc-401189-ACT

TLR7 code pour le récepteur Toll-like 7, un récepteur endosomal de reconnaissance des motifs qui détecte l’ARN simple brin riche en uridine ainsi que des ligands synthétiques de type imidazoquinoline, déclenchant une signalisation antivirale de l’immunité innée. Après activation, TLR7 transmet le signal via MYD88 afin de mobiliser les kinases IRAK et TRAF6, ce qui entraîne des programmes transcriptionnels dépendants de NF-κB et d’IRF7 induisant des interférons de type I et des cytokines pro-inflammatoires. Cette voie façonne l’activation des cellules dendritiques et des lymphocytes B, influence l’amorçage de l’immunité adaptative et module les niveaux de base de l’inflammation dans l’immunité muqueuse et systémique. Une activité TLR7 dérégulée et des effets de dosage génique ont été associés à une signalisation interféronique aberrante et à des dysfonctions immunitaires observées dans les infections, l’auto-immunité et la biologie des maladies inflammatoires.

TLR7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TLR7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TLR7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TLR7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TLR7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TLR7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TLR7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TLR7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TLR7 dans les cellules tumorales présentant une expression de TLR7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.