TLE1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423412

Descripción general

Tle1 codifica el correpresor transcripcional TLE1 (Transducin-Like Enhancer of split 1), un miembro de la familia Groucho/TLE que modula la expresión génica al unirse a factores de transcripción asociados al ADN y reclutar complejos reguladores de la cromatina. En células de ratón, TLE1 es un efector clave de los programas transcripcionales sensibles a Notch y a Wnt/β-catenina y contribuye a la especificación de linaje, el desarrollo neuronal y el mantenimiento de la identidad celular mediante la represión de promotores y potenciadores diana. Al integrar señales de vías del desarrollo, TLE1 influye en las decisiones de destino celular, el momento de la diferenciación y la proliferación dependiente del contexto. La alteración del control transcripcional vinculado a TLE1 se estudia en modelos de desregulación del desarrollo y de señalización oncogénica, donde se ven perturbados el equilibrio de las vías Wnt/Notch y la represión epigenética.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TLE1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tle1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tle1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tle1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TLE1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tle1 para la investigación de la señalización de TLE1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tle1 críticos para la función de TLE1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tle1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TLE1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TLE1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tle1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TLE1 (m) y el plásmido HDR TLE1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tle1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tle1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.