Plásmido Doble Nickase (h) TIS11D: sc-405406-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TIS11D consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TIS11D (h) y el plásmido de doble nickasa TIS11D (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ZFP36L2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TIS11D Anticuerpo (A-3): sc-365908
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TIS11D | sc-405406-NIC | 20 µg | $410.00 |
El ZFP36L2 humano codifica la proteína de unión a ARN TIS11D, un factor de dedos de zinc tipo CCCH que reconoce elementos ricos en AU en las regiones 3′ UTR para promover la desadenilación y degradación del ARNm. Mediante la regulación de la estabilidad de los transcritos, TIS11D configura programas de expresión génica vinculados al desarrollo, la activación y la diferenciación de linfocitos, en intersección con la señalización inflamatoria asociada a MAPK y NF-κB y con redes más amplias de control posranscripcional. ZFP36L2 se ha implicado en la homeostasis inmunitaria y en fenotipos oncogénicos en contextos hematológicos, donde una rotación alterada del ARN puede influir en la proliferación, la apoptosis y el compromiso de linaje. Estas características hacen de ZFP36L2 un nodo útil para analizar vías de degradación de ARN y salidas transcripcionales relacionadas con la inmunidad en modelos de células humanas.
TIS11D El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ZFP36L2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ZFP36L2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ZFP36L2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ZFP36L2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.