Plasmide CRISPR/Cas9 KO TIN2 (h): sc-404636

Présentation

TINF2 code pour TIN2, un composant central du complexe shelterin qui protège les extrémités des télomères en organisant les interactions TRF1/TRF2 et en coordonnant l’accès de la télomérase avec les mécanismes de protection des extrémités. Grâce à ces fonctions d’échafaudage, TIN2 contribue à l’homéostasie de la longueur des télomères, empêche l’activation inappropriée des signaux de dommages à l’ADN aux extrémités des chromosomes et aide à réguler le stress associé à la réplication au niveau des répétitions télomériques. La perturbation de TINF2 altère le coiffage des télomères et peut activer des réponses aux dommages de l’ADN dépendantes d’ATM/ATR, reliant ainsi le dysfonctionnement de shelterin à l’instabilité du génome. Des variants pathogènes de TINF2 sont associés à des troubles de la biologie des télomères caractérisés par un raccourcissement accéléré des télomères et des phénotypes de défaillance spécifiques de certains tissus, ce qui en fait une cible clé pour les études mécanistiques sur le maintien des télomères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TIN2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TINF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TINF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TINF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TIN2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TINF2 pour l'étude de la signalisation de TIN2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TINF2 essentiels à la fonction de TIN2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TINF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TIN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TIN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TINF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TIN2 plasmide HDR (h) et le TIN2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TINF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TINF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.