TIN2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404636

Descripción general

TINF2 codifica TIN2, un componente central del complejo shelterina que protege los extremos teloméricos al organizar las interacciones TRF1/TRF2 y coordinar el acceso de la telomerasa con los mecanismos de protección de los extremos. A través de estas funciones de andamiaje, TIN2 mantiene la homeostasis de la longitud telomérica, evita la activación inapropiada de señales de daño en el ADN en los extremos cromosómicos y ayuda a regular el estrés asociado a la replicación en las repeticiones teloméricas. La alteración de TINF2 perturba el “cap” telomérico y puede activar respuestas de daño en el ADN dependientes de ATM/ATR, vinculando la disfunción de shelterina con la inestabilidad genómica. Las variantes patogénicas en TINF2 se asocian con trastornos de la biología telomérica caracterizados por un acortamiento acelerado de los telómeros y fenotipos de fallo tisular específicos, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos del mantenimiento telomérico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TIN2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TINF2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TINF2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TINF2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TIN2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TINF2 para la investigación de la señalización de TIN2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TINF2 críticos para la función de TIN2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TINF2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TIN2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TIN2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TINF2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TIN2 (h) y el plásmido HDR TIN2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TINF2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TINF2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.