Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
TIM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423480
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TIM El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TIM, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TIM Anticuerpo (H-11): sc-166785
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TIM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423480 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Tpi1 del ratón codifica la isomerasa de triosa fosfato (TIM), una enzima central de la glucólisis que cataliza la interconversión reversible de fosfato de dihidroxiacetona y gliceraldehído-3-fosfato. Al mantener un flujo eficiente a través de la glucólisis, TIM sostiene la producción celular de ATP, el equilibrio redox y el acoplamiento metabólico con vías como la ruta de las pentosas fosfato y los aportes anapleróticos al ciclo del TCA. Por lo tanto, la actividad de Tpi1 es integral para la homeostasis bioenergética en tejidos proliferativos y diferenciados, y su desregulación es relevante para estudios de respuestas al estrés metabólico, adaptación a la hipoxia y fenotipos dependientes de la glucólisis. Las alteraciones en el control glucolítico que involucran a Tpi1 también se examinan con frecuencia en modelos de disfunción neurológica, patología hemolítica y reprogramación metabólica asociada al cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TIM (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpi1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpi1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpi1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TIM.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpi1 para la investigación de la señalización de TIM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Tpi1 críticos para la función de TIM
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpi1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TIM CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TIM CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpi1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TIM (m) y el plásmido HDR TIM (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpi1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpi1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.