Plásmido CRISPR de Activación (h) TIEG2: sc-407645-ACT

KLF11 codifica el factor de transcripción TIEG2 (gen temprano 2 inducible por TGF-β), una proteína con dedos de zinc tipo Krüppel que modula programas de expresión génica que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la apoptosis. TIEG2 integra señales de las vías TGF-β/SMAD y coopera con reguladores de la cromatina y de la transcripción para influir en la actividad promotora de genes relacionados con el crecimiento y el metabolismo. La alteración de la actividad de KLF11/TIEG2 se ha vinculado con una homeostasis endocrina y metabólica desregulada, y se ha investigado en contextos como la susceptibilidad a la diabetes y la remodelación transcripcional asociada al cáncer. Estas características hacen de KLF11 un nodo útil para analizar mecanismos de señalización a transcripción y redes reguladoras sensibles al estrés en modelos celulares humanos.

TIEG2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KLF11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TIEG2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KLF11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KLF11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TIEG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KLF11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TIEG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TIEG2 en células tumorales con expresión de KLF11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.