TIEG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407645-ACT

KLF11 codifica o fator de transcrição TIEG2 (TGF-β–inducible early gene 2), uma proteína do tipo Krüppel com dedos de zinco que modula programas de expressão gênica responsáveis por controlar a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a apoptose. O TIEG2 integra sinais das vias TGF-β/SMAD e coopera com reguladores de cromatina e da transcrição para influenciar a atividade de promotores de genes relacionados ao crescimento e ao metabolismo. Alterações na atividade de KLF11/TIEG2 têm sido associadas à desregulação da homeostase endócrina e metabólica e vêm sendo investigadas em contextos como suscetibilidade ao diabetes e remodelamento transcricional associado ao câncer. Essas características tornam o KLF11 um nó útil para dissecar mecanismos de sinalização até a transcrição e redes regulatórias responsivas ao estresse em modelos de células humanas.

TIEG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIEG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIEG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIEG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIEG2 em células tumorais com expressão de KLF11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.