Plasmide CRISPR d'Activation (h) TICAM-1: sc-414627-ACT

TICAM1 code pour TICAM-1 (également appelé TRIF), un adaptateur essentiel de la signalisation de l’immunité innée en aval de TLR3 et TLR4, qui relie l’activation des récepteurs de reconnaissance de motifs (PRR) à des programmes transcriptionnels dépendants d’IRF3/IRF7 et de NF-κB. En recrutant TBK1 et IKKε et en s’intégrant aux nœuds de signalisation TRAF/RIPK1, TICAM-1 coordonne la production d’interférons de type I, l’induction de cytokines inflammatoires et des voies de mort cellulaire programmée. Une signalisation TICAM1 dérégulée a été associée à des réponses antivirales altérées et à une inflammation aberrante, et elle est fréquemment étudiée dans le cadre de la biologie des maladies infectieuses et à médiation immunitaire. Par conséquent, TICAM1 est largement utilisé comme levier mécanistique pour explorer les voies innées dépendantes des TLR et leur dialogue avec les réseaux de stress cellulaire et de cytokines.

TICAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TICAM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TICAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TICAM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TICAM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TICAM-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TICAM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TICAM-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TICAM-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TICAM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.