Thyroperoxidase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423484

Übersicht

Das murine Gen **Tpo** kodiert die Thyreoperoxidase (TPO), ein hämabhängiges apikales Membranenzyms in Schilddrüsenfollikelzellen, das die Oxidation von Iodid sowie die Iodierung und Kopplung von Thyreoglobulin katalysiert, um die Schilddrüsenhormone T3 und T4 zu bilden. Die TPO-Aktivität verknüpft den Iodidtransport und die Organifizierung mit der Redoxkontrolle über H2O2-bildende Systeme wie DUOX/DUOXA und unterstützt so die Hormonsynthese und die Homöostase der Schilddrüsenfollikel. Eine Störung der Tpo-abhängigen Schilddrüsenhormonogenese ist in Modellsystemen mit veränderter Stoffwechselregulation sowie Wachstums- und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen verbunden und eröffnet mechanistische Ansatzpunkte für autoimmunologische Schilddrüsenpathologien, bei denen TPO ein wichtiges Antigen ist. Entsprechend dient **Tpo** als funktioneller Knotenpunkt zur Untersuchung von Programmen der Schilddrüsendifferenzierung, endokrinen Rückkopplungssignalen und oxidativen Stressantworten in Thyreozyten.

Das Thyroperoxidase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpo-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpo-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpo nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Thyroperoxidase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpo-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Thyroperoxidase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tpo-Exone abzielen, die für die Thyroperoxidase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpo-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Thyroperoxidase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Thyroperoxidase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpo-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Thyroperoxidase HDR-Plasmid (m) und Thyroperoxidase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpo-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpo-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.