Thyroglobulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401985-ACT

TG codifica a tireoglobulina, uma grande glicoproteína secretada produzida por células foliculares da tireoide que atua como o principal arcabouço para a biossíntese dos hormônios tireoidianos. No lúmen folicular, a iodação e o acoplamento de resíduos de tirosina na tireoglobulina sustentam a produção de T3 e T4 e se integram ao transporte de iodo, à atividade da tireoperoxidase e a programas de diferenciação tireoidiana conduzidos por TSH. A expressão e o processamento de TG estão ligados ao dobramento/controle de qualidade de proteínas no retículo endoplasmático e ao tráfego vesicular que regulam a secreção de tireoglobulina e a homeostase do coloide. A desregulação de TG está associada a defeitos hereditários na síntese de hormônios tireoidianos e é relevante para estudos de disfunção tireoidiana, biologia de autoantígenos e identidade de células foliculares.

Thyroglobulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Thyroglobulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Thyroglobulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Thyroglobulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Thyroglobulin em células tumorais com expressão de TG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.