Thy-1/CD90 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400608-ACT

THY1 kodiert das glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankerte Oberflächenglykoprotein Thy-1/CD90, einen Regulator von Zell‑Zell- und Zell‑Matrix-Interaktionen, der Adhäsion, Migration und die Organisation des Zytoskeletts prägt. Über Wechselwirkungen mit Integrinen und Komponenten der extrazellulären Matrix beeinflusst Thy-1/CD90 die Dynamik fokaler Adhäsionen sowie mechanotransduktive Signalwege, die mit zellulären Aktivierungszuständen verknüpft sind. Es wird breit als Linien- und Aktivierungsmarker in stromalen, endothelialen und immunologischen Kontexten eingesetzt, und seine Expression wird häufig in Prozessen wie Gewebeumbau und Fibrose, Neuroinflammation und Neuritenauswachsung sowie Signalübertragung in der Tumormikroumgebung untersucht. Eine dysregulierte THY1-Expression wurde mit entzündlicher und fibrotischer Pathobiologie sowie mit veränderter stromal‑immunologischer Kommunikation in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht.

Thy-1/CD90 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen THY1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Thy-1/CD90 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des THY1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der THY1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Thy-1/CD90-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native THY1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Thy-1/CD90-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Thy-1/CD90-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem THY1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.