Plasmide CRISPR d'Activation (h) Thrombospondin 4: sc-403528-ACT

THBS4 code la thrombospondine 4, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui module les interactions cellule–matrice et le remodelage tissulaire. La thrombospondine 4 contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire, à la dynamique des adhérences focales et à des réseaux de signalisation qui influencent l’adhésion cellulaire, la migration et la mécanotransduction, avec des effets dépendant du contexte sur les processus angiogéniques et inflammatoires. Une expression altérée de THBS4 a été associée au remodelage fibrotique et aux pathologies vasculaires, et elle est fréquemment étudiée en lien avec la composition du microenvironnement tumoral, l’activation du stroma et la formation de niches métastatiques. En tant que médiateur associé à la MEC, THBS4 constitue un point d’entrée utile pour étudier comment les signaux issus de la matrice façonnent le phénotype cellulaire dans des modèles de développement et de maladie.

Thrombospondin 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de THBS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Thrombospondin 4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus THBS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription THBS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Thrombospondin 4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus THBS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Thrombospondin 4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Thrombospondin 4 dans les cellules tumorales présentant une expression de THBS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.