Plásmido CRISPR de Activación (h) Thrombospondin 4: sc-403528-ACT

THBS4 codifica trombospondina 4, una glicoproteína secretada de la matriz extracelular que modula las interacciones célula–matriz y la remodelación tisular. La trombospondina 4 contribuye a la organización de la matriz extracelular, a la dinámica de las adhesiones focales y a redes de señalización que influyen en la adhesión celular, la migración y la mecanotransducción, con efectos dependientes del contexto sobre procesos angiogénicos e inflamatorios. La alteración de la expresión de THBS4 se ha asociado con la remodelación fibrótica y la patología vascular, y se estudia con frecuencia en relación con la composición del microambiente tumoral, la activación del estroma y la formación de nichos metastásicos. Como mediador asociado a la MEC, THBS4 constituye un punto de partida útil para investigar cómo las señales de la matriz moldean el fenotipo celular en modelos de desarrollo y enfermedad.

Thrombospondin 4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de THBS4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Thrombospondin 4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus THBS4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional THBS4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Thrombospondin 4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo THBS4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Thrombospondin 4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Thrombospondin 4 en células tumorales con expresión de THBS4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.