Plásmido CRISPR de Activación (m) Thrombospondin 1: sc-423381-ACT

Thbs1 codifica la trombospondina 1, una glicoproteína matricelular secretada que modula las interacciones célula–matriz y remodela el microambiente extracelular. En tejidos de ratón, THBS1 influye en la angiogénesis y la homeostasis vascular, en parte mediante interacciones con CD36 e integrinas y al regular la activación de la señalización latente de TGF-β. Contribuye a la adhesión y migración celulares y al diálogo inflamatorio, conectando la dinámica de la matriz extracelular con los programas de reparación de heridas y remodelación tisular. La expresión desregulada de THBS1 se ha asociado con fibrosis, interacciones tumor–estroma y patología vascular, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar fenotipos dependientes del microambiente.

Thrombospondin 1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Thbs1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Thrombospondin 1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Thbs1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Thbs1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Thrombospondin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Thbs1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Thrombospondin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Thrombospondin 1 en células tumorales con expresión de Thbs1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.