Thrombin R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420264

Übersicht

F2r kodiert den Thrombinrezeptor (proteaseaktivierter Rezeptor‑1, PAR1), einen GPCR, der durch thrombinabhängige proteolytische Spaltung aktiviert wird. Dabei wird ein „tethered ligand“ (ein kovalent gebundener Ligand) freigelegt, der eine intrazelluläre Signalweiterleitung über die Gαq‑, Gα12/13‑ und Gαi‑Signalwege auslöst. In Maus‑Zellen reguliert Thrombin R Thrombozyten‑ und Endothelantworten, den Gefäßtonus, die Barrierefunktion sowie inflammatorische Signalgebung über nachgeschaltete MAPK/ERK‑, RhoA/ROCK‑, PLCβ‑vermittelte Ca²⁺‑Mobilisierung und NF‑κB‑assoziierte Transkriptionsprogramme. Die F2r‑Aktivität verknüpft die Gerinnung mit zellulären Antworten auf Gewebeschädigung und hämostatischen Stress und beeinflusst so den thromboinflammatorischen Crosstalk und das vaskuläre Remodeling. Eine fehlregulierte PAR1‑Signalgebung wurde mit Modellen für Thrombose, Atherosklerose, sepsisassoziierte vaskuläre Dysfunktion sowie Tumor‑Stroma‑Interaktionen im Mikromilieu in Verbindung gebracht und ist damit für mechanistische Studien zur Biologie vaskulärer und entzündlicher Erkrankungen relevant.

Das Thrombin R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des F2r-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des F2r-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von F2r nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Thrombin R-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von F2r-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Thrombin R-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf F2r-Exone abzielen, die für die Thrombin R-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere F2r-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Thrombin R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Thrombin R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des F2r-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Thrombin R HDR-Plasmid (m) und Thrombin R HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von F2r-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten F2r-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.