THP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423607

Descripción general

Umod codifica la proteína de Tamm–Horsfall (THP, uromodulina), la glucoproteína secretada más abundante en la orina de los mamíferos, producida por células epiteliales de la rama ascendente gruesa del asa de Henle y del túbulo distal temprano. La THP se libera a la luz tubular, donde contribuye a la homeostasis epitelial, modula el manejo de iones mediante interacciones con procesos de transporte como la reabsorción de NaCl dependiente de NKCC2 y ayuda a conformar las redes de proteínas urinarias a través de la formación de polímeros. Mediante efectos sobre las respuestas al estrés tubular, la señalización inmunitaria innata y los programas de diferenciación epitelial, la actividad de UMOD influye en la fisiología renal y en la susceptibilidad a la lesión tubulointersticial. Las alteraciones genéticas y funcionales de Umod se asocian con fenotipos de enfermedad renal, incluida la enfermedad renal asociada a uromodulina, rasgos relacionados con la hiperuricemia y el riesgo de enfermedad renal crónica, lo que lo convierte en un locus clave para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO THP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Umod en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Umod junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Umod tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína THP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Umod para la investigación de la señalización de THP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Umod críticos para la función de THP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Umod para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido THP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido THP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Umod. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR THP (m) y el plásmido HDR THP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Umod para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Umod definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.