THADA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405868

Panoramica

THADA (thyroid adenoma associated) codifica una grande proteina citoplasmatica implicata nell’omeostasi energetica cellulare e nei processi di adattamento allo stress, con collegamenti riportati alla funzione del reticolo endoplasmatico e alla gestione del calcio. Studi genetici associano THADA alla suscettibilità alle neoplasie tiroidee e a tratti legati al sistema endocrino, e un’alterata attività di THADA è stata collegata a fenotipi metabolici in diverse popolazioni. In modelli cellulari, la perturbazione di THADA viene utilizzata per indagare vie che accoppiano il sensing dei nutrienti, la fisiologia degli organelli e il controllo della crescita cellulare. Queste caratteristiche rendono THADA un bersaglio utile per studi meccanicistici della segnalazione associata al metabolismo e della biologia tumorale dipendente dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO THADA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene THADA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del THADA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto THADA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina THADA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di THADA per lo studio della segnalazione di THADA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni THADA critici per la funzione di THADA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di THADA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal THADA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal THADA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus THADA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal THADA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR THADA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia THADA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio THADA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.