TGIF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401472-ACT

Humanes **TGIF1** kodiert **TGIF**, einen TALE-Homeobox-Transkriptionsregulator, der Genexpressionsprogramme moduliert, welche während der Entwicklung und der Gewebehomöostase Zellschicksalsentscheidungen steuern. TGIF wirkt dabei besonders als **Korepressor** in der **TGF-β/SMAD-abhängigen** Transkription und formt so Signalausgaben, die epithelial-mesenchymale Dynamiken, Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Durch Interaktionen mit SMADs und weiteren transkriptionellen Kofaktoren trägt TGIF dazu bei, Stärke und Dauer des Signalwegs fein abzustimmen, indem es extrazelluläre Reize mit einer chromatinbasierten Kontrolle der Zielgene verknüpft. Eine dysregulierte TGIF1-Aktivität oder -Expression wurde mit veränderten TGF-β-Signalzuständen in Verbindung gebracht, die in Forschungskontexten zu Entwicklungsstörungen sowie krankheitsrelevanter transkriptioneller Reprogrammierung bei Krebs und Fibrose beitragen.

TGIF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TGIF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TGIF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TGIF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TGIF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TGIF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TGIF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TGIF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TGIF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TGIF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.