Plasmide Double Nickase (m) TGF beta Receptor 2/TGFBR2: sc-423371-NIC

Le gène murin *Tgfbr2* code le récepteur 2 du TGFβ (TGFBR2), une sérine/thréonine kinase transmembranaire qui se lie aux ligands TGFB et phosphoryle TGFBR1 pour initier la signalisation canonique SMAD2/3. Cette voie assure un contrôle dépendant du contexte de la régulation du cycle cellulaire, de la différenciation, de la transition épithélio-mésenchymateuse et du remodelage de la matrice extracellulaire, tout en s’intégrant aux voies MAPK, PI3K–AKT et aux GTPases de la famille RHO. En recherche biomédicale, une activité altérée de TGFBR2 est largement utilisée pour modéliser une homéostasie tissulaire dérégulée, la modulation immunitaire et le remodelage fibrotique, ainsi que le réagencement des voies de signalisation observé en cancérologie et certains phénotypes du développement. Comme TGFBR2 se situe au sommet de la transduction du signal TGFB, la perturbation de *Tgfbr2* offre un moyen direct de disséquer les programmes transcriptionnels en aval et les circuits de rétroaction dépendants des ligands.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tgfbr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tgfbr2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tgfbr2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tgfbr2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.