Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TGase2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423375
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TGase2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TGase2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TGase2 Antibody (4G3): sc-73612
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TGase2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423375 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Tgm2** codifica la transglutaminasi 2 (TGase2), un enzima multifunzionale Ca2+-dipendente che catalizza la reticolazione delle proteine, la deamidazione e la poliamminazione, mostrando anche attività di legame al GTP e funzioni di impalcatura (scaffold). TGase2 regola il rimodellamento della matrice extracellulare, l’adesione e la migrazione cellulare, l’apoptosi e la segnalazione infiammatoria, interfacciandosi con vie come NF-κB, TGF-β, integrina/FAK e programmi di guarigione delle ferite. La sua attività influenza la dinamica del citoscheletro e la rigidità della matrice, collegando Tgm2 al rimodellamento fibrotico e alle risposte di riparazione tissutale. Una funzione deregolata di TGase2 è stata associata, in modelli preclinici, a neuroinfiammazione, adattamento allo stress metabolico e rimodellamento del microambiente tumorale, motivando studi meccanicistici in tipi cellulari murini pertinenti.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TGase2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tgm2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tgm2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tgm2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TGase2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tgm2 per lo studio della segnalazione di TGase2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Tgm2 critici per la funzione di TGase2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tgm2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TGase2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TGase2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tgm2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TGase2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TGase2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tgm2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tgm2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.