TFPI-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417987

Descripción general

TFPI2 codifica el inhibidor de la vía del factor tisular 2 (TFPI-2), un inhibidor secretado de serinproteasas tipo Kunitz que modula la proteólisis pericelular dentro de la matriz extracelular. Al inhibir proteasas implicadas en la remodelación de la matriz y en la actividad de proteasas asociadas a la coagulación, TFPI-2 influye en la adhesión, la migración y la invasión celulares, así como en la homeostasis tisular. La actividad de TFPI-2 se integra con redes de proteasas extracelulares vinculadas a la regulación de las metaloproteinasas de matriz y a la señalización relacionada con la trombina, moldeando el equilibrio entre activación e inhibición proteolítica en el microambiente tumoral y en contextos vasculares. La desregulación de la expresión de TFPI2 se ha asociado con un recambio anómalo de la matriz extracelular y fenotipos invasivos alterados en múltiples modelos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de procesos relacionados con la metástasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TFPI-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TFPI2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TFPI2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TFPI2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TFPI-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TFPI2 para la investigación de la señalización de TFPI-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TFPI2 críticos para la función de TFPI-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TFPI2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TFPI2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TFPI-2 (h) y el plásmido HDR TFPI-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TFPI2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TFPI2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.