Plasmide Double Nickase (h) TFIIIC220: sc-404920-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIIC220 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIIC220 Double Nickase (h) et le plasmide TFIIIC220 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GTF3C1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TFIIIC220 Antibody (F-12): sc-398780
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIIC220 | sc-404920-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TFIIIC220 | sc-404920-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF3C1 code pour TFIIIC220, la plus grande sous-unité du complexe TFIIIC, qui reconnaît des éléments promoteurs internes dans les gènes transcrits par l’ARN polymérase III, notamment les ARNt et d’autres petits ARN non codants. En se liant aux promoteurs et en recrutant TFIIIB, TFIIIC220 favorise l’assemblage du complexe de préinitiation de Pol III et régule le niveau de transcription en lien avec la capacité de traduction, l’adaptation au stress et la progression du cycle cellulaire. TFIIIC contribue aussi à l’organisation du génome à grande échelle en s’associant à la chromatine et à des éléments de frontière, reliant la transcription par Pol III à l’architecture nucléaire. La dérégulation du contrôle de la transcription par Pol III et de la fonction de TFIIIC est fréquemment étudiée dans des contextes de programmes de prolifération altérés, de stabilité du génome et de reprogrammation transcriptionnelle observés dans des modèles de cancer et de maladies du développement.
TFIIIC220 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GTF3C1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GTF3C1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GTF3C1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GTF3C1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.