TFIIF RAP 74 Plasmide Double Nickase (h): sc-405237-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TFIIF RAP 74 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TFIIF RAP 74 Double Nickase Plasmid (h) e il TFIIF RAP 74 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GTF2F1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TFIIF RAP 74 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405237-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIF RAP 74 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405237-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2F1 codifica TFIIF RAP 74, una subunità fondamentale del fattore generale di trascrizione IIF che coopera con la RNA polimerasi II per supportare la formazione del complesso di pre-inizio, l’uscita dal promotore e le prime fasi dell’allungamento. Coordinandosi con TFIIB, TFIIE e TFIIH, TFIIF contribuisce a modulare l’utilizzo dei siti di inizio della trascrizione e influenza programmi trascrizionali su scala genomica legati al controllo del ciclo cellulare e all’espressione di geni responsivi allo stress. L’alterazione delle reti di fattori di trascrizione della Pol II, inclusi i componenti di TFIIF, è spesso studiata nel contesto della disregolazione trascrizionale, dello stress replicativo e delle modifiche della proteostasi osservate in diversi modelli di malattia. GTF2F1 rappresenta quindi un nodo utile per indagare le dipendenze della macchina trascrizionale e i loro effetti a valle sull’organizzazione della cromatina e sulle vie di segnalazione.
TFIIF RAP 74 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GTF2F1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GTF2F1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GTF2F1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GTF2F1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.