Plasmide Double Nickase (h) TFIIF RAP 74: sc-405237-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TFIIF RAP 74 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TFIIF RAP 74 Double Nickase (h) et le plasmide TFIIF RAP 74 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GTF2F1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TFIIF RAP 74 | sc-405237-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TFIIF RAP 74 | sc-405237-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2F1 code pour TFIIF RAP 74, une sous-unité centrale du facteur général de transcription IIF, qui coopère avec l’ARN polymérase II pour soutenir la formation du complexe de préinitiation, l’échappement du promoteur et l’élongation précoce. En coordination avec TFIIB, TFIIE et TFIIH, TFIIF contribue à moduler l’utilisation du site d’initiation de la transcription et influence des programmes transcriptionnels à l’échelle du génome, liés au contrôle du cycle cellulaire et à l’expression de gènes répondant au stress. La perturbation des réseaux de facteurs de transcription de la Pol II, y compris des composants de TFIIF, est fréquemment étudiée dans le contexte de la dérégulation transcriptionnelle, du stress de réplication et des altérations de la protéostasie observées dans divers modèles de maladies. GTF2F1 constitue donc un nœud utile pour interroger les dépendances de la machinerie transcriptionnelle et leurs effets en aval sur l’organisation de la chromatine et les voies de signalisation.
TFIIF RAP 74 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GTF2F1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GTF2F1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GTF2F1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GTF2F1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.