Testican-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406915-ACT

SPOCK1 kodiert das humane extrazelluläre Matrix-Proteoglykan Testican-1, ein sezerniertes und perizelluläres Glykoprotein, das die Organisation der Matrix sowie Zell‑Matrix‑Interaktionen moduliert. Testican-1 wird mit der Regulation von Proteaseaktivität und Umbauprozessen in Verbindung gebracht, die Zelladhäsion, Migration, Neuritenauswachsung und Gewebearchitektur beeinflussen, und verknüpft es damit mit Signalwegen, die die Dynamik der extrazellulären Matrix und Programme der zellulären Motilität steuern. Eine veränderte SPOCK1-Expression wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter Krebserkrankungen sowie fibrotische oder entzündliche Zustände, in denen eine fehlregulierte Matrixumgestaltung und invasives Verhalten zentrale biologische Merkmale sind. Daher wird SPOCK1/Testican-1 häufig als kontextabhängiger Regulator von Signalprozessen im Mikromilieu und phänotypischer Plastizität untersucht.

Testican-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SPOCK1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Testican-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SPOCK1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SPOCK1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Testican-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SPOCK1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Testican-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Testican-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SPOCK1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.