TERT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423341

Descripción general

Tert codifica la subunidad catalítica de la telomerasa (TERT), una transcriptasa inversa que alarga las repeticiones teloméricas para preservar los extremos cromosómicos durante la replicación del ADN. Al mantener la longitud de los telómeros, TERT favorece la capacidad proliferativa a largo plazo e influye en la estabilidad del genoma, la senescencia replicativa y las respuestas al estrés celular. La actividad de TERT se relaciona con la señalización de daño en el ADN y con las vías de protección telomérica, incluido el “capping” (sellado) de los extremos mediado por el complejo shelterin y la regulación de puntos de control. La desregulación de la función de la telomerasa es relevante para fenotipos asociados al envejecimiento, la biología de células madre y modelos de tumorogénesis en los que el mantenimiento telomérico afecta la inestabilidad cromosómica y el destino celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TERT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tert en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tert junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tert tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TERT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tert para la investigación de la señalización de TERT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tert críticos para la función de TERT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tert para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TERT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TERT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tert. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TERT (m) y el plásmido HDR TERT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tert para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tert definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.