TERT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423341

概要

Tertはテロメラーゼ（TERT）の触媒サブユニットをコードしており、DNA複製の際に染色体末端を保護するため、テロメア反復配列を伸長する逆転写酵素である。テロメア長を維持することで、TERTは長期的な増殖能を支えるとともに、ゲノム安定性、複製老化、および細胞ストレス応答に影響を与える。TERT活性は、DNA損傷シグナル伝達やテロメア保護経路とも交差しており、シェルテリン複合体による末端キャッピングやチェックポイント制御などが含まれる。テロメラーゼ機能の破綻は、老化関連表現型、幹細胞生物学、ならびにテロメア維持が染色体不安定性と細胞運命に影響する腫瘍形成モデルにおいて重要である。

TERT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTert遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tert内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tertのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TERTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TERTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tert欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TERTの機能に不可欠なTertエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tertゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TERT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTERT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tert遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TERT HDRプラスミド（m）および TERT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTertホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTert標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。