Plásmido Doble Nickase (h) Tenascin-C: sc-400663-NIC

TNC codifica la tenascina-C, una gran glicoproteína de la matriz extracelular que se induce de manera marcada durante el desarrollo, la remodelación tisular y la inflamación. La tenascina-C modula la adhesión célula–matriz, la migración y la mecanotransducción al interactuar con integrinas y otros componentes de la matriz, dando forma a las adhesiones focales y a la señalización del citoesqueleto. A través de sus efectos sobre vías como FAK/Src, MAPK/ERK y programas de remodelación asociados a TGF-β, contribuye a la regulación de la organización del estroma y del tráfico de células inmunitarias en microambientes dinámicos. La expresión y el depósito desregulados de TNC se asocian con frecuencia con la remodelación fibrótica, estados inflamatorios crónicos y el estroma asociado a tumores, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar mecanismos patológicos impulsados por la matriz extracelular.

Tenascin-C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.