Plasmide Double Nickase (h) Tenascin-C: sc-400663-NIC

TNC code la ténascine‑C, une grande glycoprotéine de la matrice extracellulaire fortement induite au cours du développement, du remodelage tissulaire et de l’inflammation. La ténascine‑C module l’adhésion cellule–matrice, la migration et la mécanotransduction en interagissant avec les intégrines et d’autres composants de la matrice, ce qui façonne les adhésions focales et la signalisation du cytosquelette. Par ses effets sur des voies telles que FAK/Src, MAPK/ERK et des programmes de remodelage associés au TGF‑β, elle contribue à la régulation de l’organisation du stroma et du trafic des cellules immunitaires dans des microenvironnements dynamiques. Une expression et un dépôt de TNC dérégulés sont fréquemment associés au remodelage fibrotique, aux états inflammatoires chroniques et au stroma associé aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes pathologiques pilotés par la matrice extracellulaire.

Tenascin-C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.