Plásmido Doble Nickase (h) TEL: sc-402207-NIC

ETV6 (TEL) codifica un factor de transcripción de la familia ETS que actúa predominantemente como represor transcripcional y controla el mantenimiento de las células madre y progenitoras hematopoyéticas, la decisión de linaje y la proliferación homeostática. TEL integra señales de distintas vías con la regulación de la cromatina mediante interacciones con correpresores y complejos asociados a desacetilasas de histonas, configurando programas de expresión génica implicados en la diferenciación y la apoptosis. La alteración de ETV6 contribuye a la inestabilidad genómica y a un control transcripcional anómalo, y ETV6 está implicado de manera recurrente en neoplasias hematológicas a través de translocaciones, mutaciones puntuales e haploinsuficiencia. Como nodo central en el desarrollo sanguíneo y en las fusiones génicas leucemogénicas, TEL se estudia ampliamente por su papel en redes transcripcionales oncogénicas y en vías de señalización de quinasas aberrantes.

TEL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ETV6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ETV6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ETV6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ETV6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.