TEF-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-423329-KO-2

Panoramica

Tead4 codifica il fattore di trascrizione TEF-3, una proteina legante il DNA con dominio TEA/ATTS che coopera con co-attivatori come YAP/TAZ per regolare programmi genici che controllano proliferazione, sopravvivenza e decisioni sul destino cellulare. Durante lo sviluppo del topo, TEAD4 è un determinante chiave della specificazione del trofectoderma e contribuisce all’organizzazione epiteliale e all’impegno di linea attraverso una trascrizione responsiva alla via di segnalazione Hippo. L’attività di TEF-3 integra segnali/meccanocue e la segnalazione a monte mediata da chinasi per modulare geni bersaglio coinvolti nel controllo della crescita e nella differenziazione. Una segnalazione deregolata della famiglia TEAD è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi tissutale e a programmi trascrizionali oncogenici, rendendo Tead4 un nodo utile per studiare la regolazione trascrizionale dipendente dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TEF-3 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tead4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tead4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tead4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TEF-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tead4 per lo studio della segnalazione di TEF-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tead4 critici per la funzione di TEF-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tead4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TEF-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TEF-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tead4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TEF-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TEF-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tead4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tead4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.