TEF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402607-ACT

O TEAD1 humano codifica o fator de transcrição TEF-1, uma proteína de ligação ao DNA com domínio TEA/ATTS que atua em parceria com YAP/TAZ para regular programas gênicos que controlam a proliferação, a sobrevivência celular e a especificação de linhagem. O TEF-1 funciona como um efetor nuclear da via de sinalização Hippo e integra sinais de mecanotransdução e de fatores de crescimento para modular a atividade de enhancers e promotores. A desregulação da saída transcricional TEAD–YAP/TAZ tem sido associada a estados transcricionais oncogênicos, remodelamento ligado à fibrose e alterações no padrão de desenvolvimento, tornando o TEAD1 um nó central em estudos de controle do crescimento tecidual. O TEAD1 também contribui para redes de expressão gênica em músculo e no sistema cardiovascular, apoiando investigações sobre diferenciação e circuitos transcricionais de resposta ao estresse.

TEF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TEAD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TEF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TEAD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TEAD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TEF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TEAD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TEF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TEF-1 em células tumorais com expressão de TEAD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.