Plásmido CRISPR de Activación (h) TEF-1: sc-402607-ACT

El TEAD1 humano codifica el factor de transcripción TEF-1, una proteína de unión al ADN con dominio TEA/ATTS que se asocia con YAP/TAZ para regular programas génicos que controlan la proliferación celular, la supervivencia y la especificación de linaje. TEF-1 actúa como efector nuclear de la vía de señalización Hippo e integra señales derivadas de la mecanotransducción y de la señalización por factores de crecimiento para modular la actividad de potenciadores y promotores. La salida transcripcional TEAD–YAP/TAZ desregulada se ha asociado con estados transcripcionales oncogénicos, remodelación vinculada a fibrosis y patrones alterados del desarrollo, lo que convierte a TEAD1 en un nodo clave en estudios sobre el control del crecimiento tisular. TEAD1 también contribuye a redes de expresión génica musculares y cardiovasculares, lo que respalda investigaciones sobre la diferenciación y los circuitos transcripcionales de respuesta al estrés.

TEF-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TEAD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TEF-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TEAD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TEAD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TEF-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TEAD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TEF-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TEF-1 en células tumorales con expresión de TEAD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.