TDG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423321
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TDG El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TDG, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TDG Anticuerpo (D-11): sc-376652
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TDG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423321 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La TDG (glicosilasa de ADN de timina) de ratón es una enzima de reparación por escisión de bases que reconoce y elimina timina o uracilo mal apareados con guanina, ayudando a resolver desajustes G:T derivados de la desaminación y de errores de replicación. TDG también participa en la desmetilación activa del ADN al procesar derivados oxidados de 5-metilcitosina generados por enzimas TET, lo que la vincula con la regulación epigenética y el control transcripcional asociado a la cromatina. A través de estas actividades, TDG contribuye a la estabilidad del genoma, al mantenimiento de los patrones de metilación del ADN y a las respuestas celulares al daño en el ADN. Las alteraciones en la función de TDG se han asociado con estados epigenéticos desregulados y procesos mutacionales relevantes para estudios de biología del cáncer, programas de desarrollo y mantenimiento del genoma relacionado con la inflamación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TDG (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tdg en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tdg junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tdg tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TDG.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tdg para la investigación de la señalización de TDG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Tdg críticos para la función de TDG
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tdg para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TDG CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TDG CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tdg. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TDG (m) y el plásmido HDR TDG (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tdg para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tdg definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.