Tctex1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423318-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Tctex1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Tctex1ダブルニカースプラスミド（m）およびTctex1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Dynlt1bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Tctex1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tctex1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dynlt1b は、逆行性輸送、オルガネラの配置、ならびに有糸分裂紡錘体の機能を担う微小管依存性モーター複合体である細胞質ダイニンの、マウス Tctex1 軽鎖をコードする。Tctex1 は小胞やタンパク質複合体のダイニン依存的な輸送に寄与し、微小管ダイナミクスの協調制御を介して、細胞内シグナル伝達、神経細胞内輸送、繊毛形成などの過程を支える。ダイニン軽鎖の相互作用が攪乱されると、カーゴ結合や輸送の正確性が損なわれ得るため、ダイニン経路の機能不全は神経発生、繊毛生物学、細胞分裂制御に関わる表現型と結び付く。こうした理由から、Dynlt1b は細胞骨格制御、中心体／紡錘体の組織化、ならびに輸送依存的シグナル伝達経路の文脈でしばしば研究されている。
Tctex1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Dynlt1b 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Dynlt1b内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Dynlt1bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Dynlt1bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。