Tctex1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423318-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Tctex1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Tctex1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Tctex1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dynlt1b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Tctex1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tctex1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dynlt1b kodiert die Tctex1-Leichtkette des zytoplasmatischen Dyneins der Maus, eines mikrotubulibasierten Motorkomplexes, der den retrograden Transport, die Positionierung von Organellen und Funktionen der mitotischen Spindel antreibt. Tctex1 trägt zum dyneinabhängigen Transport von Vesikeln und Proteinkomplexen bei und unterstützt damit Prozesse wie die intrazelluläre Signalübertragung, den neuronalen Transport und die Ziliogenese durch koordinierte Mikrotubulusdynamik. Störungen der Interaktionen von Dynein-Leichtketten können die Frachtbindung und die Genauigkeit des Transports beeinträchtigen und bringen Dysfunktionen des Dynein-Signalwegs mit Phänotypen in Verbindung, die für Neuroentwicklung, Zilienbiologie und die Kontrolle der Zellteilung relevant sind. Daher wird Dynlt1b häufig im Kontext der Regulation des Zytoskeletts, der Organisation von Zentrosom/Spindel und transportabhängiger Signalwege untersucht.
Tctex1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dynlt1b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dynlt1b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dynlt1b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dynlt1b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.