Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tctex1: sc-402886-ACT

Le gène humain **DYNLT1** code **Tctex1**, une chaîne légère de la dynéine qui s’assemble avec la dynéine cytoplasmique pour soutenir le transport dépendant des microtubules, le positionnement des organites et le trafic intracellulaire. Par ses interactions au sein du complexe moteur **dynéine–dynactine**, Tctex1 contribue à des processus tels que l’organisation du fuseau mitotique, la fonction du centrosome et le déplacement des cargos, qui façonnent la polarité cellulaire et la division. Le transport dépendant de DYNLT1 a été associé à la biologie neuronale et ciliaire via la régulation de la localisation des protéines et la compartimentation des signaux. La dérégulation des voies de transport associées à la dynéine est fréquemment étudiée dans le contexte des mécanismes neurodégénératifs et des états prolifératifs altérés, ce qui fait de DYNLT1 un nœud utile pour explorer la dynamique du cytosquelette et les conséquences sur la signalisation.

Tctex1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DYNLT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tctex1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DYNLT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DYNLT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tctex1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DYNLT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tctex1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tctex1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DYNLT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.