TCTE1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423315

Descripción general

Tcte1 codifica TCTE1, una proteína asociada a cilios y flagelos implicada en la integridad estructural y la motilidad del axonema. En el ratón, TCTE1 se vincula a procesos que regulan la organización de los microtúbulos dentro del compartimento ciliar, favoreciendo un batido coordinado impulsado por dineína y un transporte intraflagelar eficiente. La alteración de componentes axonemales puede interrumpir la ciliogénesis y la función del flagelo espermático, lo que aporta conexiones mecanísticas con fenotipos de infertilidad masculina y con vías más amplias relacionadas con las ciliopatías. Como módulo ciliar, TCTE1 es relevante para estudiar cómo la arquitectura del axonema se integra con programas de señalización celular que dependen de cilios primarios y móviles intactos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TCTE1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tcte1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tcte1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tcte1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TCTE1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tcte1 para la investigación de la señalización de TCTE1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tcte1 críticos para la función de TCTE1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tcte1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TCTE1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TCTE1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tcte1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TCTE1 (m) y el plásmido HDR TCTE1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tcte1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tcte1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.