Plasmide CRISPR d'Activation (h) TCP-1 ζ2: sc-403048-ACT

CCT6B code la sous-unité zêta 2 de la chaperonine humaine contenant TCP1 (TCP-1 ζ2), un composant du complexe cytosolique TRiC/CCT qui assure, de manière dépendante de l’ATP, le repliement des protéines nouvellement synthétisées ou dénaturées par le stress. Ce complexe est central pour la protéostasie en favorisant la maturation de protéines du cytosquelette telles que l’actine et la tubuline, et en coordonnant le contrôle qualité des protéines avec la progression du cycle cellulaire. Par son rôle dans le repliement et l’assemblage de complexes multisuunités, TCP-1 ζ2 influence des voies liées à la dynamique du cytosquelette, au transport intracellulaire et aux réponses cellulaires au stress. La dérégulation de l’activité des chaperonines est fréquemment étudiée dans des contextes de stress protéotoxique, de prolifération altérée et de remodelage à l’échelle des systèmes, notamment dans la recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives.

TCP-1 ζ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCT6B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TCP-1 ζ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCT6B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCT6B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TCP-1 ζ2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCT6B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TCP-1 ζ2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TCP-1 ζ2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CCT6B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.