Plásmido Doble Nickase (h) TCF7L2/TCF4: sc-400607-NIC

TCF7L2 (también conocido como TCF4) codifica un factor de transcripción con dominio tipo “high-mobility group” (HMG) box que actúa como efector nuclear clave de la señalización canónica Wnt/β-catenina. Al asociarse con β-catenina y co-reguladores, TCF7L2 modula programas transcripcionales que controlan decisiones de destino celular, proliferación y diferenciación en múltiples contextos tisulares, incluido el epitelio intestinal y el páncreas endocrino. La regulación dependiente de TCF7L2 influye en la accesibilidad de la cromatina e integra señales de vías del desarrollo y metabólicas para moldear una expresión génica específica del contexto. La variación genética y la actividad desregulada de TCF7L2 se han vinculado con rasgos metabólicos y el riesgo de diabetes tipo 2, y la salida transcripcional aberrante de Wnt/TCF se estudia con frecuencia en biología del cáncer y de células madre.

TCF7L2/TCF4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TCF7L2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TCF7L2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TCF7L2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TCF7L2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.