TCF-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400821

Descripción general

TCF7L1 codifica el factor de transcripción TCF-3, una proteína de unión al ADN del grupo de alta movilidad (HMG) que actúa como regulador dependiente del contexto de la expresión génica aguas abajo de la señalización canónica Wnt/β-catenina. Al asociarse con β-catenina o con correpresores transcripcionales, TCF-3 ayuda a controlar decisiones de destino celular, la proliferación y programas de especificación de linaje, incluido el mantenimiento de células madre y progenitoras. La actividad de TCF7L1 se interseca con vías de desarrollo y diferenciación y contribuye a la regulación del estado de la cromatina en potenciadores sensibles a Wnt. La desregulación de la señalización TCF7L1/TCF-3 se ha estudiado en relación con estados de diferenciación alterados y fenotipos proliferativos en modelos celulares relevantes para enfermedades, incluidas perturbaciones de la vía Wnt asociadas al cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TCF-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TCF7L1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TCF7L1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TCF7L1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TCF-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TCF7L1 para la investigación de la señalización de TCF-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TCF7L1 críticos para la función de TCF-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TCF7L1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TCF-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TCF-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TCF7L1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TCF-3 (h) y el plásmido HDR TCF-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TCF7L1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TCF7L1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.