TCF-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400821

Visão geral

TCF7L1 codifica o fator de transcrição TCF-3, uma proteína de ligação ao DNA do grupo de alta mobilidade (HMG) que atua como regulador dependente do contexto da expressão gênica a jusante da sinalização canônica Wnt/β-catenina. Ao interagir com a β-catenina ou com correpressores transcricionais, o TCF-3 ajuda a controlar decisões de destino celular, proliferação e programas de especificação de linhagem, incluindo a manutenção de células-tronco e progenitoras. A atividade de TCF7L1 se cruza com vias de desenvolvimento e diferenciação e contribui para a regulação do estado da cromatina em enhancers responsivos a Wnt. A desregulação da sinalização TCF7L1/TCF-3 tem sido estudada em relação a estados de diferenciação alterados e fenótipos proliferativos em modelos celulares relevantes para doenças, incluindo perturbações da via Wnt associadas ao câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TCF-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TCF7L1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TCF7L1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TCF7L1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TCF-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TCF7L1 para a investigação da sinalização de TCF-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TCF7L1 críticos para a função TCF-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TCF7L1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TCF-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TCF-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TCF7L1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TCF-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TCF-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TCF7L1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TCF7L1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.