Plásmido CRISPR de Activación (h) TBX4: sc-405242-ACT

TBX4 codifica un factor de transcripción de la familia T-box que se une al ADN mediante un dominio T-box conservado para regular programas de expresión génica del desarrollo. En la biología humana, TBX4 es un impulsor clave de la morfogénesis de las extremidades posteriores y de la diferenciación mesenquimal, coordinando redes transcripcionales que se entrecruzan con la señalización FGF, WNT, BMP y SHH durante el patrón de desarrollo y la especificación tisular. Las alteraciones en la dosis o la actividad reguladora de TBX4 se han relacionado con malformaciones congénitas de las extremidades y con enfermedad vascular pulmonar pediátrica, lo que refleja su papel en vías del desarrollo y de la organogénesis. Como regulador nuclear, TBX4 se estudia con frecuencia por sus efectos en el compromiso de linaje, los circuitos transcripcionales y el control potenciador-promotor.

TBX4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TBX4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TBX4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TBX4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TBX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TBX4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TBX4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TBX4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TBX4 en células tumorales con expresión de TBX4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.