Plasmide CRISPR d'Activation (h) TBX3: sc-400754-ACT

TBX3 code un facteur de transcription de la famille T-box qui régule l’organisation du développement, les décisions de destinée cellulaire et la morphogenèse des tissus grâce à une liaison à l’ADN spécifique de séquence et à une répression ou une activation transcriptionnelle. Dans les cellules humaines, TBX3 s’intègre aux programmes de croissance et de différenciation, en interagissant avec des voies qui contrôlent la prolifération, la sénescence, la dynamique épithélio-mésenchymateuse et la spécification des lignées cellulaires. Une expression dérégulée de TBX3 a été associée à des phénotypes développementaux altérés et a été étudiée pour ses rôles dans des réseaux transcriptionnels oncogéniques qui influencent le contrôle du cycle cellulaire et des caractéristiques métastatiques. En tant que régulateur nucléaire, TBX3 est couramment étudié à l’aide de l’ingénierie du génome et du profilage du transcriptome afin de cartographier les cibles en aval et des programmes transcriptionnels dépendants du contexte.

TBX3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TBX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TBX3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TBX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TBX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TBX3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TBX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TBX3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TBX3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TBX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.