TBK1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-425191-LAC

Mouse Tbk1 kodiert die TANK-bindende Kinase 1 (TBK1), eine Serin/Threonin-Kinase, die Signale der angeborenen Immunität und Stressantworten integriert. TBK1 phosphoryliert IRF3/IRF7 und ist in NF-κB-Signalwege nachgeschaltet an Mustererkennungsrezeptoren wie TLR3/4, RIG-I/MDA5 und cGAS–STING eingebunden, um Typ-I-Interferon- und inflammatorische Genprogramme zu koordinieren. Über antivirale Antworten hinaus trägt TBK1 zur selektiven Autophagie und Mitophagie bei, indem es Autophagie-Adapter reguliert und so Immun-Signalgebung mit zellulärer Homöostase verknüpft. Eine fehlregulierte TBK1-Aktivität wurde mit inflammationassoziierten Phänotypen und neurodegenerationsbezogenen Signalwegen in Verbindung gebracht und ist damit relevant für mechanistische Studien in der Immunologie, Infektionsbiologie und zu zellulären Stressantworten.

TBK1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Tbk1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TBK1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Tbk1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TBK1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Tbk1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.