TBK1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425191-LAC

Il gene murino Tbk1 codifica la TANK-binding kinase 1 (TBK1), una chinasi serina/treonina che integra la segnalazione dell’immunità innata e dello stress. TBK1 fosforila IRF3/IRF7 e interagisce con le vie di NF-κB a valle dei recettori di riconoscimento dei pattern (pattern-recognition receptors) come TLR3/4, RIG-I/MDA5 e cGAS–STING, coordinando programmi genici dell’interferone di tipo I e dell’infiammazione. Oltre alle risposte antivirali, TBK1 contribuisce all’autofagia selettiva e alla mitofagia tramite la regolazione di adattatori dell’autofagia, collegando la segnalazione immunitaria all’omeostasi cellulare. Un’attività di TBK1 deregolata è stata implicata in fenotipi associati all’infiammazione e in vie legate alla neurodegenerazione, rendendola rilevante per studi meccanicistici in immunologia, biologia delle infezioni e risposte cellulari allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale TBK1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tbk1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TBK1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tbk1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TBK1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tbk1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.