Plasmide CRISPR d'Activation (m) TARDBP: sc-433014-ACT

Le gène murin **Tardbp** code pour **TARDBP (TDP-43)**, une protéine multifonctionnelle se liant à l’ARN et à l’ADN, qui régule la transcription, l’épissage des pré-ARNm, la stabilité et le transport des ARNm, ainsi que la dynamique des granules de stress. TARDBP coordonne des programmes de métabolisme de l’ARN qui influencent la différenciation neuronale, la fonction synaptique et la protéostasie, et participe à une boucle d’autorégulation qui maintient une homéostasie d’expression strictement contrôlée. Une perturbation de la localisation de TARDBP ou de son activité de liaison à l’ARN dérègle l’assemblage des ribonucléoprotéines et peut modifier l’expression de gènes impliqués dans l’organisation du cytosquelette et la fonction mitochondriale. Des anomalies de la biologie de TARDBP sont fortement associées à des mécanismes liés à la neurodégénérescence, notamment des altérations du traitement de l’ARN et des voies d’agrégation protéique, ce qui en fait un nœud clé pour modéliser des phénotypes cellulaires pertinents pour la maladie dans des systèmes murins.

TARDBP Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tardbp sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TARDBP Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tardbp dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tardbp, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TARDBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tardbp natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TARDBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TARDBP dans les cellules tumorales présentant une expression de Tardbp silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.